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大卫Rusnak
张贴了大卫Rusnak Bioagilytix Insight,基于细胞的测定

应用基于细胞的测定,第1部分:中和抗体(NAB)检测

应用基于细胞的测定,第1部分:中和抗体(NAB)检测

以蛋白质为基础的生物制剂有可能诱导机体产生多种免疫反应,从很小到危及生命。其中一种不良的免疫反应是产生中和抗体(nab),它可以与给药的生物治疗药物结合,并阻止它执行其预期的生物功能,反过来对产品的有效性和安全性产生负面影响。

虽然标准的免疫分析法可以用于检测包括NAbs在内的药物特异性抗体,但它们不能将NAbs与其他发现的抗体区分开来。那么我们能用什么来确定通过免疫分析检测到的抗体是否具有中和能力呢?

基于细胞的测定是检测Nabs的理想选择
虽然复杂的基于细胞的中和抗体测定是行业检测NAB的存在的方法,因为它们最能模仿NABs在生物系统内施加效果的机制。这些测定评估由药物产品中的药物产品或由药物产品抑制的配体引发的细胞内信号传导事件,并且还可以包括在细胞表面的细胞外结合事件的研究。虽然有因素可以证明使用基于非细胞的Nab测定的用途,例如具有阻塞配体活性的药物或有限的适当细胞系,美国FDA欧洲药品管理局(EMA)两者普遍认为,基于细胞的测定更加反映了实际发生在身体中的情况并尽可能推荐它们。

基于细胞的Nab测定设计的考虑因素
基于细胞的Nab测定的发展需要彻底的规划和周到的测定设计,以便以经济效率的方式产生最佳结果。例如,应通过了解生物治疗药物产品的作用机制,选择直接或间接测定的选择,或者结果不足以了解NAB对临床结果的影响。

鉴定阳性对照抗体也至关重要地开发基于细胞的Nab测定 - 一种能够中和感兴趣的药物以评估测定的敏感性。阴性对照,配体对照和药物对照在Nab测定的验证中也显着。每个控件用于帮助验证测定的不同方面,每个控件都提供在研究中重要的信息。

或许最重要的是,选择一种合适的、稳定的细胞系,使其对药物产生特定的反应,以及使用的平台提供测量特定反应所需的适当的灵敏度水平和动态范围。最终,检测NAbs的能力依赖于科学家检测特定分析细胞反应变化的能力,因此端点读出的选择是非常重要的。细胞反应可以分为早期反应(受体结合;受体磷酸化;cAMP或ATP检测;信号转导特异性蛋白磷酸化)或晚期(细胞增殖或凋亡;细胞因子生产;报告基因表达事件),可以包括无数的结果,如细胞内底物的磷酸化,钙动员,增殖,或细胞死亡。

使用基于细胞的测定法检测的分层方法
当使用一个118金宝搏 作为免疫原性研究的一部分,我们BioAgilytix团队使用了一种分层方法来评估NAbs。首先,使用配体结合免疫分析法对样品进行筛选,以检测任何抗药物抗体(ADAs)的存在。阳性筛选的样品在验证分析中重新分析,确认阳性的ADA样品可能进一步表征其中和能力、结合亲和力、同型分型和其他特征。时专门NAb分析,我们确定最合适的格式根据作用机理和所有其他因素上面所提到的,用我们丰富的跨平台的经验开发细胞增殖,生物标志物、基因表达、基因记者,锁定细胞介导细胞毒性(ADCC)和补体依赖细胞毒性(CDC)满足NAb的化验检测需求具有高特异性、灵敏度和精度。

在Bioagilytix开发或验证的Nab测定的实例包括:

  • 记者化验(发光)
  • 生长因子刺激的磷酸化(MSD)
  • 生长因子刺激增殖(Celltiter Glo)
  • 赞美依赖的细胞毒性(MTS)
  • IFN-Gamma释放(伊利安斯)
  • 标记的药物装订(流式细胞仪)
  • 竞争约束力(伊利安斯)

基于细胞的测定值
因为它们使用活细胞,基于细胞的测定能够产生更具有生物学相关或具有生理相关性的结果 - 这是理解Nabs如何影响给药的生物治疗的关键。虽然使用细胞系增加了复杂性的层,但它提供了更清晰的图片实际发生的内容以及如何解决它,以及基于正确的单元格的测定专长,您可以更深入地了解药品安全和功效。

在我们即将发布的博客中,我们将深入了解基于细胞的效价分析在GMP下批释放测试中的应用,以及BioAgilytix如何利用基于细胞的分析在开发的发现阶段带来新的见解。

如果您想要更多关于BioagilyTix的基于细胞的测定能力的信息,今天和我们的一位科学家谈谈。

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