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阿诺Kromminga博士
发布的阿诺Kromminga博士 BioAgilytix洞察力,免疫原性

关于设定ADA切割点的考虑

关于设定ADA切割点的考虑

切割点是区分阳性和阴性导致免疫性测定的阈值。建立适当的切割点对于确保可接受的测定敏感性至关重要,尽管在设定切割点时需要考虑特异性特征,但是当在免疫原性测定中设置切割点时,应考虑一些基本方面。

1.统计方法
应该使用最新的统计工具,使用treatment-naïve受试者的样本来计算切割点,以获得可靠的数字,并考虑到分析的可变性。切割点应根据使用至少50个样品在至少3天不同的测试结果确定。建议ADA筛选试验的临界值由阴性对照人群中第95百分位的90%的单边低置信区间确定。这将确保至少5%的假阳性率和90%的置信度水平。由于免疫原性的评估应该采用分层的方法,验证性试验应该在筛选试验之后进行。验证检测的切点应该用80%的单边低置信区间来计算,允许1%的假阳性率。

虽然这些算法是直接的,但有多个因素需要考虑。其中包括值的分布和数据的可变性。特别是,如果信号的均值在试验、平板或分析师之间变化,但均值周围的方差是恒定的,则应该应用标准化因子。大多数免疫原性筛选试验采用浮动切割点,即使均值和方差都是恒定的。其次,离群值的确定对于数据的统计评估至关重要。异常值的消除可能是具有挑战性的,方法仍然是不同的实验室。应该迭代地执行删除操作,并证明数据点的删除是合理的。

2.目标疾病切点
由于不同的免疫应答水平,不同的群体可能导致不同的免疫应答。例如,通常预期,具有自身免疫疾病的患者可能具有比正常种群或免疫受损患者更高的背景免疫反应性。因此,来自不同靶群体和疾病状态的样本可以具有可能导致从测定的背景信号变化的组分,并且对于正在研究的离散人群,可能需要不同的切割点。此外,一些疾病实体通常被归类为不同的疾病实体,但实际上它们是具有不同病因和各种临床症状和症状的综合征。因此,一种目标疾病群体与另一个目标疾病群体不同,或者在其他靶期疾病中,可能与同一目标疾病的研究人群的免疫反应性不同。因此,可能需要靶疾病特异性切割点来确认测定验证期间确定的切割点适用于正在研究的人群。

除了免疫刺激的内在差异外,在研究预验证期间使用的商业样品可以与研究样本不同。在这些情况下,应使用来自研究人群的足够数量的样品来计算研究中的靶疾病切割点。此外,如果研究人群内的总信号值在预研究中的信号中不同> 30%,则可能需要在研究中的切割点。In addition, consideration of the possible need of a study-specific cut point may arise if the incidence of false positives diverges too greatly from the desired 5% rate, i.e.e less than 2% or greater than 10% can lead to a request from regulatory agencies to assess/consider an in-study cut point.

3.预先存在的抗体
treatment-naïve受试者可能由于之前接触过类似或相关结构,或由于产品相关化合物如赋形剂或杂质/污染物的存在而存在天然抗体。虽然一些预先存在的抗体在自身免疫性疾病的背景下经常遇到(如风湿性因子、胰岛素),其他抗体可能是交叉反应的或指向生物药物的非蛋白部分。一个特定的焦点应该是针对已有的抗体蛋白质改性(如PEGylation)化验需要来确定ADA的特异性蛋白质组件以及修改治疗蛋白质产品,即多个化验需要衡量免疫反应分子的不同领域。

在任何情况下,在计算测定切片时需要考虑预先存在的抗体,并且在存在预先存在的抗体的情况下可能需要进行定性筛选测定方法的替代。例如,使用诸如滴定测定的半定量测定类型的ADA增加的测试样品可以提供有关治疗蛋白质产物对不通过定性测定提供的产物免疫原性的影响的信息。特别地,需要确定基线样品(具有可报告结果)的受试者的患病率,并且需要计算药物管理后ADA滴度显着增加的基线ADA阳性受试者的百分比。在这种方法之后,通过科学合理的余量(例如四倍或九倍)的基线滴度大于基线滴度的ADA滴度被认为是治疗的。应该注意的是,建议使用诸如双重或三倍的滴度的低串联稀释方案。由于滴定测定的格式,基于滴定法的不精确边缘,应谨慎比较近滴度值。

引用:

  • FDA指南:2016年4月工业治疗蛋白质产品的免疫原性试验的检测与验证。
  • EMA指南: 6种生物技术衍生治疗性蛋白免疫原性评估指南,EMEA/CHMP/BMWP/14327/2006金宝博滚球 Rev. 1, 2015年9月。
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